Ankieta: Ile zarabiasz na programie antywirusowym?
W szczególności UCMSC są znane ze swoich właściwości immunosupresyjnych, w tym niskiej ekspresji cząsteczki głównego kompleksu zgodności tkankowej klasy I i czynników kostymulujących, takich jak CD80 i CD86 (Tipnis i in., 2010). Ostatnie badania wskazują, że egzosomy pochodzące z UCMSC (U-exo) odgrywają znaczącą rolę w modulacji odporności, regeneracji tkanek epivir 150mg generyczne i obronie przeciwdrobnoustrojowej poprzez bezpośrednie modulowanie odpowiedzi immunologicznej i wzmacnianie potencjału proliferacyjnego tkanek (Hollweck i in., 2012; Monguio-Tortajada i in. al., 2017; Lv i in., 2020; Liu i in., 2021; Palma i in., 2021). Jednak rola U-exo w infekcjach wirusowych dróg oddechowych i patogenezie nie została w pełni zbadana. Do tej pory zidentyfikowano cztery gatunki HCoV, w tym 2 alfa-koronawirusy (HCoV-NL63 i HCoV-229E) oraz 2 beta-koronawirusy (HCoV-OC43 i HCoV-HKU1). Ludzki sezonowy beta-koronawirus (HCoV-OC43) i alfa-koronawirus (HCoV-229E) uzyskano z KBPV i namnażano odpowiednio w komórkach HCT8 i MRC-5, w pożywce RPMI i DMEM uzupełnionej 10% FBS i 1% penicyliny /streptomycyna.
Spośród nich HCoV-OC43 są uważane za alternatywne źródło, które zapewnia wgląd w wysoce zjadliwe koronawirusy, takie jak koronawirus zespołu oddechowego na Bliskim Wschodzie (MERS-CoV), koronawirus zespołu ciężkiej ostrej niewydolności oddechowej 1 (SARS-CoV-1) i SARS-CoV -2, ponieważ wszystkie te wirusy należą do tego samego rodzaju beta-koronawirusów (Li i in., 2020). HCoV powoduje ostrą infekcję dróg oddechowych z różnymi objawami, chociaż zwykle po infekcjach następują łagodne choroby górnych dróg oddechowych, a obecnie nie jest dostępna żadna specyficzna terapia do leczenia infekcji HCoV (Park i in., 2020). Tymczasem IFV był intensywnie badany przez wiele lat. Istotne jest zrozumienie interakcji HIV i wrodzonych komórkowych czynników restrykcyjnych, ponieważ stanowią one stosunkowo niewykorzystane źródło potencjału terapeutycznego. Wirusy układu oddechowego pozostają poważnym globalnym zagrożeniem dla zdrowia ze względu na potencjalne pojawienie się nowych, wysoce zjadliwych szczepów, które mogą doprowadzić do pandemii. W tym badaniu wykorzystaliśmy dobrze zróżnicowane hodowle HNEC w ALI do oceny przeciwwirusowego działania U-exo na IFV i HCoV, oprócz wykazania obiecującego potencjału modeli hodowli ALI jako odpowiedniej platformy do badania nowych terapii przeciwko pojawiającym się wirusy układu oddechowego. Chociaż ostatnie badania wprowadziły system hodowli ALI jako odpowiedni model do badania infekcji wirusowej i patogenezy (Loo i in., 2020), zastosowanie modelu hodowli ALI do oceny skuteczności przeciwwirusowej potencjalnych leków lub środków terapeutycznych było ograniczone.
Zebrano supernatanty w celu określenia 50% dawki zakaźnej hodowli tkankowej (TCID50) w celu obliczenia miana wirusa. Miano wirusa określono metodą Spearmana-Karbera i wyrażono jako jednostki TCID50/ml. Następnie zebrano kondycjonowaną pożywkę i wyizolowano egzosom przy użyciu klasycznej metody ultrawirowania (Patel i in., 2019) lub metody oczyszczania z wytrącaniem z wirowaniem i chromatografią wykluczania według instrukcji producenta (Cell Guidance Systems). Egzosomy to małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (EV), które są naturalnie wydzielane przez większość typów komórek, mają średnicę mniejszą niż 150 nm i są wzbogacone w tetraspaniny, takie jak CD9, CD63 i CD81, oraz markery endosomalne, w tym Alix i TSG101. Journal of Cell Biology. Zastosowano pusty plazmid kontrolny, aby upewnić się, że każda studzienka do transfekcji zawiera taką samą ilość całkowitego DNA. Komórki A549 wysiano na 96-studzienkowe płytki i przejściowo transfekowano mieszaniną plazmidów przy użyciu odczynnika do transfekcji Lipofectamine 2000 (Invitrogen) następnego dnia. Komórki utrzymywano w wilgotnej atmosferze z 5% CO2 w 37°C i co drugi dzień uzupełniano świeżą pożywkę. Po 24 godzinach pożywkę zmieniono, dodano U-exo (50 cząstek/komórkę) i kontynuowano inkubację przez 8, 24 i 48 godzin w temperaturze 37°C. Po inkubacji dodawano roztwór bromku 3-(4,5-dimetylotiazolilo-2)-2,5-difenylotetrazoliowego (MTT) (Sigma-Aldrich) na 4 godziny, a następnie traktowano sulfotlenkiem dimetylu przez 30 minut.
Pokrótce, komórki MDCK wysiane na 96-dołkowej płytce zaszczepiono rozcieńczonymi supernatantami wirusowymi i inkubowano w 37°C przez 1 godzinę. W skrócie, 50 μl zawiesiny egzosomów rozcieńczono w 100 μl DPBS i zmieszano z 150 μl 4% paraformaldehydu w celu utrwalenia. U-exo przygotowano w buforze do ponownego zawieszania egzosomów (Thermo Fisher Scientific), poddano SDS-PAGE i przeniesiono na membrany z difluorku poliwinylidenu. Używając Power SYBR Green PCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific), zmierzono poziomy ekspresji genów wirusa i gospodarza. 99. H. Agarwal, S. Venkat Kumar i S. Rajeshkumar, „Przegląd zielonej syntezy nanocząsteczek tlenku cynku — podejście przyjazne środowisku”, Resour.-Effic. Knockdown RNA REAF ratuje infekcję komórek ribavirin skutki uboczne HeLa-CD4 przez zakażenie HIV-189.6, HIV-2CBL-23, SIVAGM (African Green Monkey; TYO-1), SIVMAC (Macaque; 32H) i SIVSM (Sooty Mangabey; B670) w porównaniu z nieukierunkowana kontrola siRNA (CB). Biologiczne skutki zmienionych odpowiedzi komórek T oceniano przez analizę kontroli wirusowej i patologii rdzenia kręgowego. Próbki kontrolne ustawiono na 100% przeżycie, a wszystkie inne próbki wyrażano względem kontroli. 97. R. Kumar i in., „Właściwości przeciwdrobnoustrojowe nanomateriałów ZnO: przegląd”, Ceram. 86. C. Balagna i wsp., „Virucidal effect against coronavirus SARS-CoV-2 of a silver nanoklaster/kompozyt krzemionki napylanej powłoką”, Open Ceram.